普通0.2ml管和0.1ml管对qPCR实验结果会有什么不同的影响？
    首先，我们先来看一下市场上这些主流qPCR仪，比如国外的ABI的7500 Fast，Roche的LightCycler96和LightCycler480，Bio-Rad的CFX96 Touch，等以及国内的朗基Q1000/Q1000+和Q2000系列，它们都已经以0.1ml管为标配耗材，像赛默飞更是向定量PCR用户推荐优先选择低容（0.1ml）耗材。趋势已来，势不可挡。

    那么在定量PCR实验中，为什么0.1mlPCR管比普通0.2ml管有着天然的优势呢？

    首先我们看外形，普通管要比0.1ml管高很多（见图1）。

Ø 缩小死体积，避免挂壁冷凝水

    当加入同样体积的反应液时，相比0.2ml管，0.1ml管的反应液上方空间（也称死体积)则相对小得多，浪费的空间就更少（见图2）。实验中随着样品台逐渐升温，管内加热后产生的水蒸气会进入上方空间，普通管容纳了更多的水蒸气，导致反应液被浓缩，反应液成分的变化进而影响到导热性和液体温度，从而影响实验结果的稳定性和精确性。相反，对于0.1ml管来说，就会大大减少死体积，使得反应成分更稳定，重复性更好。

    另外，由于普通管中的水蒸气要经过更长距离的裸露部分才能到达顶部的热盖处（见图3），不可避免地导致一些冷凝水挂壁现象的形成，这对荧光定量PCR实验是致命的。因为挂壁的冷凝水就像一个个微型透镜，造成荧光的折射和散射，劣化并衰减检测器信号的一致性，降低灵敏度。

    而0.1ml管由于被样品台充分包裹，裸露在样品台外面的部分极少，与热盖的距离也更近，大大降低了挂壁冷凝水的产生，以及冷凝水污染的可能性，当然实验数据就更准确啦。

图2 

图3    

Ø 短光程，提高荧光捕获率

    由于试剂成本越来越高，实验设计的反应体积越来越小，最常见就是20-25ul，甚至在定量PCR实验中，5-10ul的用户也是屡见不鲜，对0.1ml管来说绰绰有余，即使加50ul 也不在话下（见图4）。

    对于顶部检测的荧光定量PCR仪来说，在同等体积下，从激发光进入反应液到产生的荧光被探测器接收，PCR管的高度越低，光经过的路程（即光程）就越短，（0.1ml管比普通管的光程缩短达10.6mm），检测器的荧光捕获率就更高，实验的结果就越美丽。

图4

    总之，当联合使用0.1ml管和白管时，更可以发挥1+1>2的效果，即使在2.5-5ul的极限体积下，也可以得到较好的扩增曲线，有图为证（见图5）。

2.5ul 10倍稀释样品扩增曲线

图5   5ul 四通道多重试剂扩增曲线